一、技術(shù)原理與實(shí)驗步驟
將目的基因片段連接至合適的原核表達載體后，轉化到菌株內，隨后利用菌自身的蛋白表達系統通過(guò)溫度和誘導劑的控制，誘導其在宿主菌內表達目的蛋白質(zhì)，將表達樣品進(jìn)行SDS-PAGE 以檢測表達蛋白質(zhì)。原核表達系統是至今為止最為成熟可靠的蛋白表達系統，其優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗周期短、成本低、產(chǎn)量高。
二、服務(wù)流程
1.依據客戶(hù)提供的蛋白基因、載體要求，設計克隆方案，構建原核表達載體?？商峁?xHis、GST、MBP等攜帶標簽及腸激酶、凝血酶等蛋白酶切除標簽蛋白的表達載體，提供多種選擇；
2.將構建好的質(zhì)粒轉化到菌株內，優(yōu)化溫度、IPTG濃度等條件誘導蛋白表達，SDS-PAGE驗證；
3.對蛋白性質(zhì)進(jìn)行分析，選擇合適的方法分離純化蛋白；
4.依據客戶(hù)要求如蛋白純度、是否需要帶標簽、帶何種類(lèi)型的標簽、蛋白溶解緩沖液要求，是否凍干等提供最終蛋白產(chǎn)品，附加載體構建報告、SDS-PAGE檢測報告、目的基因質(zhì)粒、重組細菌菌株、重組表達菌株等信息。
三、大腸桿菌表達系統
大腸桿菌蛋白表達系統是目前應用最廣泛，也是最經(jīng)濟實(shí)惠的蛋白表達系統。E. coli具有遺傳背景清楚、細胞增殖快、表達量高、穩定性好和抗污染能力強等特點(diǎn)，適用于多種屬蛋白的表達，尤其對小分子蛋白的生產(chǎn)具有極大的優(yōu)勢，但也存在一些問(wèn)題，如易形成包涵體和含有內毒素等。泰斯拓生物提供從密碼子優(yōu)化到重組蛋白表達/純化的一站式服務(wù)以及內毒素去除等附加服務(wù)，以滿(mǎn)足不同的定制需求。我們擁有豐富的E. coli 可溶性蛋白表達/純化及蛋白復性經(jīng)驗，擁有多種E. coli細胞株和表達載體，可為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的原核蛋白表達服務(wù)。
