| 產(chǎn)品名稱(chēng) |
HCT-15/Taxol |
| 商品貨號 |
MZ-0616 |
| 中文名稱(chēng) |
人結腸癌紫杉醇耐藥株 |
| 組織來(lái)源 |
人結腸癌 |
| 形態(tài)特征 |
上皮細胞樣 |
| 生長(cháng)特性 |
貼壁生長(cháng) |
| 特征特性 |
收到細胞后按照下面的要求操作：培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長(cháng)到 70-80%的匯合度時(shí)，去掉培養液，加入含 500ng/ml Taxol 藥物的培養液，放入培養箱，這段時(shí)間肯定會(huì )有小部分細胞懸浮起來(lái)，但是不要緊，通過(guò)換液可以去掉，下面的細胞待長(cháng)滿(mǎn)就可以消化傳瓶了，這時(shí)可以一直用含藥培養液來(lái)消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 1000ng/ml，含藥培養液用于細胞培養都沒(méi)問(wèn)題的，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里面加藥物了。 |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養條件 |
1640+10%FBS+1%P/S+500ng/ml紫杉醇 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 |
