| 產(chǎn)品名稱(chēng) |
PUMC-HUVEC-T1 |
| 商品貨號 |
MZ-5180 |
| 中文名稱(chēng) |
人臍靜脈血管內皮細胞 |
| 形態(tài)特征 |
上皮樣 |
| 生長(cháng)特性 |
貼壁生長(cháng) |
| 特征特性 |
形態(tài)呈現為典型的鵝卵石樣排列，已證明在體外可傳至40代。PUMC-HUVEC-T1內皮標記vWF、CD31、CD34均陽(yáng)性，可結合凝集素，電鏡下可見(jiàn)緊密連接和W-P小體，Matrigle上可形成管型。不同代數的HUVEC-T1細胞核型正常穩定（P12、P13、P19、P38），裸鼠體內接種不成瘤（P9和P33） |
| 培養條件 |
ECM專(zhuān)用培養基，空氣，95%；CO2，5%。 溫度：37℃ |
| 傳代方法 |
建議第一次1:2傳代 換液頻率2~3次/周 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
90FBS+10%DMSO,推薦無(wú)血清凍存液 |
