| 產(chǎn)品說(shuō)明 |
支原體是最小和自我復制的原核生物，是原代和連續細胞系培養物的常見(jiàn)污染物。已經(jīng)表明，微囊藻污染影響細胞生長(cháng)，形態(tài)和代謝。由于其尺寸小和柔韌性，支原體可以通過(guò)0.2μm的常用過(guò)濾器。此外，與細菌和真菌不同，微囊菌污染對常用抗生素具有抗性，并且不容易在視覺(jué)上被發(fā)現。這些缺點(diǎn)強調需要定期篩查以控制支原體污染。常規篩選方法包括微生物培養，熒光DNA染色和生化檢測方法。然而，支原體培養僅限于專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗室，需要2-4周。由于存在破碎的細胞核，DNA熒光染色的結果難以解釋。各種生化檢測耗時(shí)且通常缺乏靈敏度。最近，基于聚合酶鏈反應（PCR）的方法已被開(kāi)發(fā)為快速方便地檢測低水平支原體感染，由于其極端的靈敏度和特異性，其提供了優(yōu)于常規方法的巨大優(yōu)勢。 支原體16S rRNA序列的計算機比對研究揭示了高度保守序列的存在。根據這些序列設計的引物允許支原體DNA片段的特異性擴增，從而高度靈敏地檢測支原體。ScienCell? 支原體PCR檢測試劑盒是基于16S rRNA的PCR測定，包括2X反應緩沖液，引物組，以及內部擴增對照（IAC）和陽(yáng)性樣品對照。我們選擇的屬特異性引物組識別出占污染98%的五種典型污染支原體物種（即M.hyorhinis，M。arginini，M。orale，M。fermentans和A.laidlawi），以及Ureaplasma，Spiroplasma和Acholeplasma屬的成員，它們占污染的剩余2%。該試劑盒不擴增真核和細菌DNA。IAC被設計為通過(guò)同一組引物與目標支原體序列同時(shí)共擴增。得到的對照條帶通過(guò)分子量的差異與靶條帶區分開(kāi)，表明DNA擴增的發(fā)生。因此，可以鑒定由于在一些細胞培養物中存在PCR抑制劑而導致的假陰性結果。我們的試劑盒還提供陽(yáng)性樣品對照，它是發(fā)酵乳桿菌的非感染性基因組DNA（gDNA）。另一方面，無(wú)模板（即無(wú)DNA的DI H 2 O）陰性樣品對照可以幫助確定由于殘留污染是否存在假陽(yáng)性結果。每個(gè)實(shí)驗應包括陽(yáng)性和陰性樣品對照，以及IAC。 |
